CCMB開發(fā)低成本新型測(cè)試

細(xì)胞和分子生物學(xué)中心(CCMB)的研究人員開發(fā)了一種新的低成本和低技術(shù)要求的SARS-CoV-2測(cè)試所需的測(cè)試，稱為反轉(zhuǎn)錄巢式PCR(RT-nPCR)測(cè)試。

此測(cè)試不需要實(shí)時(shí)定量RT-qPCR。CCMB研究團(tuán)隊(duì)開發(fā)的RT-nPCR已顯示出與標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測(cè)試相當(dāng)?shù)男阅?。嵌套式PCR(RT-nPCR)方法不依賴于RT-qPCR，而是使用標(biāo)準(zhǔn)RT-PCR作為終點(diǎn)分析的一部分。

在比較這兩種測(cè)試結(jié)果的過(guò)程中，研究人員發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的RT-qPCR測(cè)試在真實(shí)的測(cè)試場(chǎng)景中檢測(cè)效率可能較低(低于50%)，這可能是由于許多樣品中的病毒代表性較低。這一發(fā)現(xiàn)帶動(dòng)了直接在測(cè)試環(huán)境中監(jiān)視檢測(cè)效率的重要性。

“我們開發(fā)并測(cè)試了一種RT-nPCR方案，該方案包括用于擴(kuò)增四個(gè)SARS-CoV-2擴(kuò)增子和對(duì)照人擴(kuò)增子的多重初級(jí)RT-PCR，然后是用于單個(gè)擴(kuò)增子的次級(jí)巢式PCR。我們還檢查了RT-nPCR在合并檢測(cè)中和在不分離RNA的情況下直接擴(kuò)增中的用途。” CCMB主任Rakesh Mishra說(shuō)。

使用RT-nPCR檢查從鼻咽拭子樣本中分離的RNA，該樣本先前已使用兩種RT-qPCR測(cè)試之一進(jìn)行了測(cè)試，并比較了結(jié)果。發(fā)現(xiàn)將兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測(cè)試結(jié)合在一起，RT-nPCR測(cè)試能夠通過(guò)RT-qPCR將90%的檢測(cè)樣品鑒定為陽(yáng)性。

在標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測(cè)試陰性的樣本中，它還檢測(cè)出13%的樣本為陽(yáng)性(可能是假陰性)。根據(jù)這項(xiàng)研究中通過(guò)RT-nPCR測(cè)試通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的假陰性率，據(jù)估計(jì)，在實(shí)際測(cè)試場(chǎng)景中，多達(dá)50%的陽(yáng)性樣品在RT-qPCR的單次通過(guò)測(cè)試中可能逃脫了檢測(cè)。

一份聲明說(shuō)，印度醫(yī)學(xué)研究理事會(huì)(ICMR)僅推薦將逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測(cè)用于新型檢測(cè)。

“這項(xiàng)新測(cè)試正在等待ICMR的批準(zhǔn)。我們可能會(huì)要求ICMR在沒(méi)有RT-qPCR機(jī)的地方使用該測(cè)試。” Mishra說(shuō)。